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CRISPR那些事儿
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FAQ
是否可以与常规的抗生素和青霉素、链霉素、两性霉素、庆大霉素等混合使用
由于该试剂本身已具备常规抗生素的功能，且为了减少细胞生存压力，我们不建议在使用该试剂期间再使用其他的抗生素。
检测清除细胞仍存在支原体感染
顺利获得处理的细胞，绝大多数支原体应被清除殆尽，如遇减少但未被清除完全，可将工作浓度增加50 %再处理1个周期。
支原体清除导致细胞死亡或状态差
对于大部分细胞，经测试支原体清除无细胞状态上的影响，但对于存在的敏感细胞，建议清除支原体前备份细胞，在清除支原体时细胞死亡或状态差时，将工作浓度减半，周期增加一轮，即28 days。
是否可以与常规的抗生素和青霉素、链霉素、两性霉素、庆大霉素等混合使用
由于该试剂本身已具备常规抗生素的功能，且为了减少细胞生存压力，我们不建议在使用该试剂期间再使用其他的抗生素。
检测清除细胞仍存在支原体感染
顺利获得处理的细胞，绝大多数支原体应被清除殆尽，如遇减少但未被清除完全，可将工作浓度增加50 %再处理1个周期。
支原体清除导致细胞死亡或状态差
对于大部分细胞，经测试支原体清除无细胞状态上的影响，但对于存在的敏感细胞，建议清除支原体前备份细胞，在清除支原体时细胞死亡或状态差时，将工作浓度减半，周期增加一轮，即28 days。
是否可用于试剂的支原体检测
对于常用的细胞培养试剂，如培养基、血清等，本试剂盒可检测支原体，检测时无需进行样本制备，直接进行PCR反应后点样即可；对于DMSO、乙醇等有机溶剂，本试剂盒无法检测。
阴性对照出现条带
更换新启用的阴性标品进行复核，注意点样时更换枪头、点样优先阴性及阴性标品存放，避免样品间的交叉污染
样本反复检测结果不符
PCR法检测支原体较为灵敏，应注意样本间的交叉污染，取样时，在无菌条件下单独取样每个样品，进行样本处理、PCR反应后，待样本冷却再进行下一步操作，避免气溶胶污染样。
KO细胞系是否适用于所有类型的细胞？
KO细胞系可以在多种类型的细胞中应用，包括癌细胞、干细胞、原代细胞等。然而，不同类型的细胞对基因编辑的敏感性和效率可能有所不同。在某些细胞类型中，基因敲除可能更具挑战性，需要优化转染条件和选择合适的基因编辑工具。
如何选择合适的载体类型？
选择载体时，应考虑实验的目的和宿主细胞的类型。例如，质粒载体常用于细菌中基因的表达或扩增，病毒载体则更适合用于哺乳动物细胞中的基因转导。除此之外，载体的启动子、复制子以及抗生素选择标记也需要根据具体需求进行选择。
什么是KO细胞系？
KO细胞系（Knockout Cell Line）是顺利获得基因编辑技术（如CRISPR-Cas9）敲除或删除特定基因的细胞系。这意味着目标基因被完全移除或失去功能，使研究人员能够观察该基因缺失对细胞行为和生物学过程的影响。这种细胞系在生物医学研究中非常重要，因为它们提供了直接分析基因功能和疾病机制的实验工具。
为什么研究人员要使用KO细胞系？
研究人员使用KO细胞系来解析基因功能，因为敲除基因能够揭示该基因在细胞生长、分化、代谢、信号传导等过程中的具体作用。顺利获得比较敲除基因的细胞与正常细胞的差异，科研家可以深入分析基因在疾病中的作用，进而开发新的治疗方法。例如，KO细胞系在癌症、遗传病和神经退行性疾病的研究中具有重要应用。
什么是Prime Editing？
Prime Editing是一种新型基因编辑技术，能够在不引入双链DNA断裂的情况下实现精确的基因编辑。它拥有两个核心的组分，分别是pegRNA与PEmax基因编辑酶（Cas9n-RT）。pegRNA不仅能够定位目标序列，还包含要修改的碱基信息。pegRNA与PEmax基因编辑酶（Cas9n-RT）结合后组成编辑系统后，pegRNA引导PEmax到指定的编辑位点上，切断DNA的单链，并逆转录出pegRNA中的待修改序列，然后将该序列插入到目标基因组位置中，从而实现精准的单碱基替换或小范围的插入和删除。
Prime Editing 7（PE7）与传统的CRISPR/Cas9技术有何不同？
传统的CRISPR/Cas9技术主要顺利获得在目标DNA上引入双链断裂，再利用细胞同源重组修复机制来实现基因编辑。这种策略有较多风险，如编辑效率和纯合概率低，容易导致随机的插入或缺失突变等。Prime Editing则不需要DNA双链断裂。Prime Editing具有Cas9n-RT编辑酶系统与pegRNA两个关键组分，可实现更为精确和安全的基因编辑，减少了脱靶效应。
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